Ученые МФТИ предложили модель для генной терапии слепоты
Исследователи Центра живых систем МФТИ разработали метод культивирования фрагментов сетчатки человека в лаборатории. Это позволит тестировать вирусные векторы для генной терапии до испытаний на животных, ускоряя разработку лечения слепоты из-за дегенерации фоторецепторов. Работа опубликована в издательстве Springer Nature Link. Данную информацию сообщает портал Научная Россия.
Современная оптогенетическая терапия использует безвредные вирусы для доставки генов светочувствительных белков в клетки сетчатки. Клинические испытания на основе вируса AAV для гена RPE65 уже показали улучшение зрения у пациентов с врожденным амаврозом Лебера. Однако доклиническая оценка на животных часто не воспроизводится на человеке из-за различий в строении сетчатки и иммунной системе.
«Наш подход с культивированием эксплантатов донорской сетчатки позволяет изучать взаимодействие вирусов с тканью человека, сохраняя ее архитектуру», — пояснил первый автор Алсаллум Алмакдад. Сетчатку извлекают в течение шести часов после смерти донора, вырезают фрагменты пробойником 5 или 8 мм и помещают на мембранные вставки с питательным раствором. Ткань остается жизнеспособной до двух недель.
На второй день на поверхность наносят вирусные частицы AAV с генами-репортерами. Через 7–14 дней проводят анализ: фиксацию, криостатное резание на срезы 13 мкм и иммунофлуоресцентную окраску. Это позволяет увидеть, какие клетки затронуты вирусом. Метод объединяет удобство клеточных культур со сложностью целого органа, сохраняя все типы нейронов и глиальных клеток.
Разработаны методики отдельно для макулярной и периферической зон сетчатки. Модель позволяет имитировать субретинальную и интравитреальную инъекции, предсказывая распределение вектора. Это ускорит разработку терапии для пигментного ретинита, болезни Штаргардта и возрастной макулярной дегенерации.
